实验十一 DNA的粗提取与鉴定

师哈哈达人

第六章 遗传和变异实验十一  dna的粗提取与鉴定教学目的
　　1、初步掌握dna的粗提取和鉴定的方法
　　2、观察提取出来的dna物质实验原理
　　1、dna在nacl溶液中的溶解度，是随着nacl的浓度的变化而改变的。当nacl的物质的量浓度为0.14mol／l时,dna的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。
　　2、dna不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的dna。
　　3、dna遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定dna的试剂。注意事项
　　1、步骤3析出含dna的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具
　　鸡血细胞液（5～10ml）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g／ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／l和0.015mol／l的nacl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100ml，1个， 50ml， 500ml，各2个），漏斗，试管（20ml，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100ml，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排　一课时
课前准备
    制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／ml的柠檬酸钠溶液100ml，置于500ml烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180ml），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2 min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。
板书实验十一 dna的粗提取与鉴定实验原理
    1、析出溶解在nac1溶液中的dna。
    2、用冷酒精提取出含杂质较少的dna。
    3、dna在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
　　1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min
　　2、溶解细胞核内的dna
　　3、析出含dna的黏稠物：蒸馏水300ml，逆时针方向搅拌，缓慢
　　4、过滤：取黏稠物
　　5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min
　　6、过滤：取滤液。
　　7、提取出含杂质较少的dna，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min
　　8、dna的鉴定：沸水浴5min（（１）无变化（２）蓝色）上节课我们通过几个验证性实验，证明了dna是主要的遗传物质。那么dna是什么样的物质呢？今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。
　  通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。　　制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。
　　大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。
　　1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。
　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。
　　3、在dna的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。共2页，当前第1页12

实验十一  DNA的粗提取与鉴定
　　下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。
　　在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：
　　为什么要加蒸馏水？加入蒸馏水后细胞将会怎样？
　　（让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破）
　　为什么要用力搅拌？
　　（可以加速血细胞和细胞核的破裂）
　　所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。
　　在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎dna。
　　观察滤取出来的黏稠物的颜色。有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解dna时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。
　　将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有dna损失。
　　加入冷酒精时动作要慢。
　　当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色？（黄色）
　　这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。
　　利用沸水浴的5 min。
　　步骤3中加入蒸馏水的目的？与步骤1有什么区别？
　　（步骤3中加蒸馏水是使nacl溶液的浓度逐渐降至0．14mol／l，使dna的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破）
　　步骤7为什么要加50ml的冷酒精？
　　（因为dna不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的dna丝状物可以析出。悬浮于溶液中）
　　现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？
　　（有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色）
　　这一鉴定结果说明什么问题？
　　（提取出的丝状物是dna）
　　那么你看到的丝状物的粗细是不是dna分子的直径呢？
　　（不是。dna分子直径只有2nm。丝状物是多个dna分子聚在一起形成的）
　　下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。　　今天我们通过实验将dna提取出来进行了观察和鉴定，那么dna的化学组成，分子结构和复制是怎样的？我们下节课再继续研究。共2页，当前第2页12

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